Исследовательские пептиды обычно поставляются в виде лиофилизированного (сухого вымороженного) порошка, потому что в таком виде они гораздо стабильнее при перевозке и хранении. Прежде чем использовать их в лабораторной работе, этот порошок нужно растворить в жидкости — этот шаг называется разведением (реконституцией). При аккуратном выполнении получается прозрачный исследовательский раствор с концентрацией, которую вы рассчитали и записали.
Это руководство описывает процедуру разведения только как лабораторную методику — выбор растворителя, его правильное добавление и расчёт получаемой концентрации. Оно не описывает какое-либо использование полученного раствора за пределами лабораторных исследований, и ничто здесь не является рекомендацией по применению у людей или животных.
- Разведение растворяет сухой пептид в растворителе, образуя исследовательский раствор.
- Обычный растворитель для исследовательской работы — бактериостатическая или стерильная вода.
- Добавляйте растворитель медленно по стенке флакона и аккуратно покручивайте — никогда не встряхивайте.
- Концентрация = общий пептид (мг) ÷ добавленный растворитель (мл). Запишите её.
Что такое разведение
Лиофилизированный пептид — это твёрдая гранула или плёнка на дне запаянного флакона. Разведение означает просто добавление отмеренного объёма растворителя, чтобы пептид перешёл в раствор. Количество пептида во флаконе не меняется — вы лишь выбираете, в каком объёме жидкости его растворить, и этот выбор задаёт итоговую концентрацию.
Что используется в процедуре
Три вещи: запаянный флакон с пептидом; подходящий растворитель — бактериостатическая вода (вода с небольшим количеством бензилового спирта, который сохраняет стабильность многоразового флакона) или стерильная вода для однократного использования; и чистый мерный шприц для переноса точного объёма растворителя. Работайте на чистой поверхности и сначала протрите пробки флаконов спиртовой салфеткой.
Основные шаги
- Заранее определите объём растворителя — он задаёт концентрацию (см. следующий раздел).
- Наберите этот объём растворителя в мерный шприц.
- Введите иглу во флакон с пептидом и дайте растворителю медленно стекать по внутренней стенке стекла — не прямо на гранулу пептида.
- Извлеките шприц и аккуратно покрутите флакон или дайте ему постоять, пока раствор полностью не станет прозрачным. Не встряхивайте.
- Если что-то не растворилось или раствор мутный, дайте ему отстояться; мягкий нагрев до комнатной температуры может помочь.
Расчёт концентрации
Концентрация — это просто количество пептида, делённое на объём добавленного растворителя. Если во флаконе 10 мг пептида и вы добавляете 2 мл растворителя, раствор составляет 10 ÷ 2 = 5 мг на мл. Добавьте 1 мл — и тот же флакон даст 10 мг/мл; добавьте 5 мл — и получится 2 мг/мл. Количество пептида задано флаконом — объём растворителя контролируете вы. Всегда подписывайте флакон концентрацией и датой.
